上海光學(xué)顯微鏡的要求有哪些

時(shí)間：2021-05-13 來(lái)源：admin 點(diǎn)擊：2503

(1)適當(dāng)?shù)暮穸?。這種厚度可以在更好的光學(xué)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)高的分辨率，并且與系統(tǒng)的景深兼容。

(2)足夠透明。

(3)能夠在吸收差異的基礎(chǔ)上形成足夠的對(duì)比度。

幾乎所有的生物材料都可以通過(guò)石蠟包埋、切片(或涂抹)、粘貼、石蠟溶解、透明等工藝獲得，以滿足標(biāo)本厚度和透明度的要求，然后通過(guò)染色程序獲得一定程度的對(duì)比度。

奧林巴斯透射光學(xué)顯微鏡常用的生物和醫(yī)學(xué)組織切片，通常厚3-7微米。在該厚度范圍內(nèi)，當(dāng)用低功率物鏡(例如，10x)觀察時(shí)，景深完全足以觀察整個(gè)切片厚度；當(dāng)用高倍率物鏡(例如100倍)觀察時(shí)，景深僅為切片厚度的一小部分。從上到下不斷的微調(diào)可以給人一個(gè)切片的整體印象。因此，具有5^-7um厚度的常規(guī)截面可以被認(rèn)為是低放大率和高放大率理想之間的折衷，這兩者都允許更好的景深和分辨率。同時(shí)，由于各種原因，這種諧波厚度在實(shí)際工作中也符合很多要求。，物體的精細(xì)結(jié)構(gòu)并不總是**的；其次，在非常薄(1-V25m)的切片中，生物標(biāo)本的三維關(guān)系不可見(jiàn)。相反，當(dāng)使用8至10um或更大厚度的切片時(shí)，除了分辨率的可辨別損失之外，在生物樣品的不同水平上存在互惠互利。

在固定、包埋、切片、石蠟溶解和透明后，動(dòng)物和植物材料的標(biāo)本足夠薄和透明

但是對(duì)比度很小，對(duì)比度主要是因?yàn)檎凵浜脱苌?。很明顯，相比之下，這個(gè)標(biāo)本遠(yuǎn)非理想。但這通過(guò)減少折射效應(yīng)用“吸收劑”覆蓋了它，并通過(guò)吸收的差異增加了對(duì)比度。通過(guò)將標(biāo)本包裹在加拿大樹(shù)膠或其他合成包裹介質(zhì)中，可以減少標(biāo)本和周圍區(qū)域之間的折射。當(dāng)所有這些封裝的介質(zhì)通過(guò)蒸發(fā)或聚合而硬化時(shí)，它們的折射率接近于固定的或脫水的植物和動(dòng)物組織的主要成分的折射率。在大多數(shù)動(dòng)物和植物組織中，該值介于1.51和1.54之間。這種方法也可以消除蓋玻片下反射造成的閃光。

一個(gè)多世紀(jì)以來(lái)，有效的方法是染色，這種方法與奧林巴斯顯微鏡標(biāo)本形成了很好的對(duì)比。一般來(lái)說(shuō)，未染色的生物樣本，尤其是當(dāng)放置在折射率與生物樣本相似的介質(zhì)中時(shí)，圖像中的對(duì)比度很小。在染色樣品中，對(duì)比度的增加是基于染料的選擇性分布。染色標(biāo)本和未染色標(biāo)本的對(duì)比有很大差異。

生物切片通常粘貼在標(biāo)準(zhǔn)尺寸為26×76毫米、厚度為1.1^-1.3mm.的載玻片上。載玻片的兩側(cè)應(yīng)該是平行的平面。對(duì)玻璃載體厚度的要求不是很嚴(yán)格，但是當(dāng)厚度超過(guò)一些高度校正的聚光器的自由工作距離時(shí)，載玻片厚度對(duì)于聚焦光源和在物平面中形成視場(chǎng)孔徑變得很重要。在這種情況下，厚度為0.9^-1.0mm的載玻片是合適的。